[小鼠LRP16的细胞体表达,子LRP16多克隆抗体的制备和鉴定]
Feifei Zhang1, Jian Li1, Xiangying Xu1
1College of Anesthesiology, Xuzhou Medical University, Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou 221004, China.
概括
研究人员成功地在 prokaryotes 中表达了与小鼠白血病相关的蛋白质16 (LRP16),并开发了一种高度特定的子抗小鼠LRP16多克隆抗体,用于进一步的功能研究.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 蛋白质表达方式
背景情况:
- 白血病相关蛋白16 (LRP16) 是一种参与某些生物过程的蛋白质.
- 了解LRP16的功能需要特定的工具,如抗体,用于检测和研究.
- Prokaryotic 表达系统提供了一种具有成本效益的方法来生产重组蛋白质.
研究的目的:
- 为了实现小鼠LRP16.16的特定抗原序列 (氨基酸59-145) 的 prokaryotic 表达.
- 为了准备一个高位,特定的子抗老鼠LRP16多克隆抗体.
- 在小鼠组织中验证抗体对内源LRP16的特异性.
主要方法:
- 分子克隆被用来构建 prokaryotic 表达等离子体 pLS962-LRP16.
- 再组合的LRP16蛋白被表达在E. coli Rosetta中,使用Ni-NTA亲和和和凝过色谱进行净化.
- 聚克隆抗血清在子中产生,抗体特异性通过ELISA,西部斑点和免疫光分析得到证实.
主要成果:
- SDS-PAGE证实了LRP16融合蛋白作为包含体的不溶性表达.
- 艾丽莎显示高抗血清 titre 的 1:256,000.
- 西方斑点和免疫光分析验证了抗体在小鼠组织中对内源性LRP16的特定识别.
结论:
- 已经成功地实现了LRP16基因片段的 prokaryotic表达.
- 准备了一种具有高特异性和标位的子抗老鼠LRP16多克隆抗体.
- 这种抗体为未来研究LRP16.6的功能提供了宝贵的工具.
