通过结合过器辅助样本制备和本地消化,改善了单克隆抗体中宿主细胞蛋白的识别

科学领域:

• 生物制药开发 生物制药开发
• 分析化学 分析化学
• 蛋白质组学是指蛋白质组学.

背景情况:

• 生物疗法中的宿主细胞蛋白 (HCP) 构成安全风险,影响产品的稳定性.
• 像ELISA这样的当前量化方法缺乏HCP识别能力.
• 液体染色体质谱法 (LC-MS) 可以识别医疗人员,但与ELISA相比,其动态范围有限.

研究的目的:

• 开发一种有效的HCP丰富方法,以改善生物治疗中的识别.
• 通过使用LC-MS来提高HCP分析的灵敏度和动态范围.
• 为了能够在复杂的生物制药样本中对医疗保健人员进行全面的表征.

主要方法:

• 一个新的策略,结合了过器辅助样本制备 (FASP) 与本地消化.
• 在样本准备后进行枪支蛋白质组学分析.
• 适用于NISTmAb标准和内部抗体样本.

主要成果:

• 与标准的本地消化相比,拟议的方法显著改善了抗体去除.
• 实现了HCP检测 (12470 kDa) 的广泛分子量覆盖.
• 在NISTmAb中确定了155名使用过器辅助本地消化与标准本地消化的HCP.
• 在内部抗体样本中,医疗保健人员的量化水平低至0.03 ppm.

结论:

• 过器辅助的本地消化,其次是枪蛋白质组学,是HCP识别和表征的强大策略.
• 这种方法克服了LC-MS用于HP分析的动态范围限制.
• 该方法具有高灵敏度和广泛的分子量覆盖,对于生物治疗过程开发和质量控制至关重要.