在人体血中通过代理校准和UHPLC-MS/MS/MS对内源性类固醇和激素避孕药的量化

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学
• 临床诊断 临床诊断 临床诊断

背景情况:

• 在生物样本中量化低度类固醇在分析上具有挑战性.
• 免疫试验受到交叉反应的影响,需要先进的技术,如 (超) 高性能液体染色学-并联质谱学 ((U) HPLC-MS/MS).
• 内生类固醇分析的一个关键限制是缺乏真正的空白矩阵用于外部校准.

研究的目的:

• 开发一种强大的替代品校准方法,用于在人体血中敏感和选择性量化内源性和外源性类固醇.
• 为了使在临床相关范围内的广泛类固醇分析物的矩阵匹配量化.
• 将内源性和外源性类固醇分析整合到一个单一的综合测定中.

主要方法:

• 开发一种使用1,2-二甲基利米达-5-硫尼尔化物 (DMIS) 衍生为雌激素的替代校准方法.
• 使用稳定同位素标记的替代校准剂和用于矩阵匹配量化的内部标准.
• 优化了UHPLC条件,窄孔柱,蛋白质沉和固相提取,以提高灵敏度和分辨率.

主要成果:

• 在人体血中获得了高精度和准确度的敏感量化 (pg/mL水平).
• 在一项试验中,成功地将内源性类固醇的替代品校准与外源性避孕药的外部校准相结合.
• 在多个校准级别中证明了分析物和替代校准物之间的并行性.

结论:

• 开发的方法提供了一种敏感,选择性和准确的方法来量化人体血中的类固醇,克服了以前的分析挑战.
• 这种综合测试提供了全面的荷尔蒙分析,结合了内源性和外源性类固醇测量.
• 结构化验证策略与监管原则保持一致,为未来使用替代校准的LC-MS/MS测定提供参考.