质谱学驱动的表皮图映射:用于免疫治疗目标的二甲基碳酸盐共价标签的应用 编程细胞死亡蛋白 1

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 结构生物学 结构生物学
• 质谱测量质量谱测量

背景情况:

• 单克隆抗体 (mAbs),特别是抗编程细胞死亡蛋白1 (PD1) mAbs,在免疫瘤学中至关重要.
• 准确的表位图绘制对于理解和开发有效的抗体疗法至关重要.

研究的目的:

• 开发和应用二甲基碳酸盐共价标记质谱学 (DEPC CL-MS) 用于详细地绘制抗PD1 mAbs.的表位图.
• 确定PD1上的精确抗体结合点,并将DEPC CL-MS与X射线结晶学进行比较.
• 评估DEPC CL-MS在确认AlphaFold结构预测中的实用性.

主要方法:

• 用尼沃卢马布或一种新型抗人类PD1 mAb (CU-MAB) 化PD1.
• DEPC共价标签,然后进行自下而上的液体染色学-并联质谱学 (LC-MS/MS) 分析.
• 对DEPC修改的分析在有约束力和无约束力的条件下进行.

主要成果:

• DEPC CL-MS在PD1残留物S27,S60,S62,S127和K131中发现了显著的修饰变化,表明了抗体结合点和形状变化.
• 结果与PD1/nivolumab. 的现有X射线结晶学数据有很强的相关性.
• 这些发现验证了AlphaFold对PD1/nivolumab和PD1/CU-MAB相互作用的结构预测.

结论:

• DEPC CL-MS是一种敏感,特异性和高效的方法,用于绘制抗PD1 mAbs. 的表位图.
• 这种溶液技术提供了对PD1-抗体相互作用的快速洞察,补充了结构生物学方法.
• DEPC CL-MS通过确认结构模型和识别结合部位来加速治疗性抗体的开发.