开发一种基于PCR的测试方法,用于评估挤出料对白斑病的生物安全风险
Hung Nam Mai1, Paul J Schofield1, Wendy M Sealey2
1Aquaculture Pathology Laboratory, School of Animal & Comparative Biomedical Sciences, The University of Arizona, Tucson, Arizona, USA.
Journal of fish diseases
|June 24, 2025
概括
一个新的单阶段PCR测定有效选配方水的白斑综合症病毒 (WSSV) DNA. 这种方法与实时PCR相结合,通过区分传染性和非传染性病毒材料来提高水产养殖中的生物安全性.
科学领域:
- 水生动物的健康状况.
- 分子诊断学 分子诊断学
- 水产养殖生物安全
背景情况:
- 配制的水产料推动了水产养殖的增长,但由于潜在的病原体污染,造成了生物安全风险.
- 目前的PCR方法无法区分传染病原体和非活化基因组片段.
- 由于没有甲类细胞系,因此限制了在水产料中对传染病原体的查.
研究的目的:
- 开发和验证一种常规的一步PCR试验,用于选配方水产料的传染病原体.
- 区分水中的传染性和非传染性白斑综合征病毒 (WSSV).
- 为水产养殖料中WSSV提供实用的生物安全解决方案.
主要方法:
- 开发一种常规的一步PCR试验,针对WSSVDNA聚合酶基因.
- 挤出料的制备,添加不同度的感染WSSV的肉.
- 使用开发的一步PCR,实时PCR和WOAH推的方法选料.
- 通过为无特定病原体 (SPF) 的Penaeus vannamei提供刺料来验证感染性WSSV的存在.
主要成果:
- 开发的一步常规PCR成功放大了WSSVDNA,具有特定的amplicon大小 (334和341 bp).
- 在单步PCR中设置的一种特定的原始剂产生了980bp的片,显示出高特异性和100个副本的检测限制.
- 实时PCR方法 (开发和WOAH推) 检测到了WSSV DNA,但使用980bp amplicon的一步PCR证实了中没有感染性病毒.
- 给SPF养WSSV的料并没有导致疾病,这表明没有传染性WSSV.
结论:
- 一个一个步骤的常规PCR测定放大980bp的安普利康为水中WSSV检测提供了高的特异性.
- 建议将实时PCR用于初始查和特定的一步常规PCR用于确认的综合方法用于水产的生物安全性.
- 这一策略提供了一个实际的解决方案,用于评估水产料中WSSV风险,直到类细胞系可用于感染查.
