一个集成的平台,用于高通量提取和基于大质谱的胆固醇和神素的量化

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 脂质储存疾病,如尼曼-皮克疾病C型 (NPC),涉及细胞脂质的积累,主要是未化的胆固醇.
• 目前的方法,如菲律宾光检测有局限性,包括不特定的结合,多个步骤,和低定量精度,阻碍高通量选.
• 准确和高效的细胞胆固醇量化对于开发这些遗传性疾病的新疗法至关重要.

研究的目的:

• 开发一个集成的,半自动的,高通量协议用于细胞胆固醇提取和量化.
• 建立一个无标签的测定方法,以准确地测量384井板格式的胆固醇.
• 验证该方法的效率和适用于选试验化合物和多重化脂质分析的适用性.

主要方法:

• 开发使用液体处理平台和高通量质谱 (MS) 的集成工作流程.
• 从神经干细胞中提取脂质,使用甲基 tert-butyl 以太 (MTBE) 和 13C-胆固醇作为内部标准.
• 一个半自动化的协议,可以在2小时内在384井板格式中进行脂质提取和MS分析.

主要成果:

• 综合平台表现出优异的量化线性和可重复性 (一天内和一天内,R2>0.99).
• 在胆固醇提取方面,获得了很高的恢复率 (83-107%).
• 该方法成功应用于选241种化合物,并显示了多重化和胆固醇定量的能力.

结论:

• 开发的集成和半自动化平台为细胞胆固醇量化提供了一种高效,无标签和高通量方法.
• 这种测试克服了传统方法的局限性,使得精确的查脂质储存疾病的治疗方法.
• 工作流的适应性通过多重脂质分析将其实用性扩展到其他脂质储存疾病.