从不同基因位置的gp64的过渡CRISPR-Cas9-介导破坏中检测出百科病毒变异
Madhuja Chakraborty1, Lisa Nielsen1,2, Delaney Nash2
1Department of Chemical Engineering, University of Waterloo, 200 University Avenue West, Waterloo, ON N2L 3G1, Canada.
International journal of molecular sciences
|June 26, 2025
概括
克里斯普尔-卡斯9基因编辑暂时准百科病毒GP64基因,减少病毒载体,同时保持蛋白质生产. 这种方法增强了Baculovirus表达载体系统 (BEVS) 用于生物制剂的生产.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 病毒学 病毒学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 细菌病毒表达载体系统 (BEVS) 对于生产蛋白质和复杂的生物制剂至关重要.
- 细菌病毒GP64蛋白质对于病毒进入和细胞间传播至关重要.
- 以前的策略旨在破坏gp64基因以减少baculovirus的联合生产.
研究的目的:
- 调查感染期间使用CRISPR-Cas9暂时准baculovirusgp64基因的疗效.
- 开发一种用于检测低频Gp64突变的变异调用方法.
- 评估针对gp64对病毒载体水平和外来蛋白质生产的影响.
主要方法:
- 采用传染-感染 (T-I) 试验,在六个不同的位置准AcMNPV gp64 基因.
- 利用CRISPR-Cas9进行过渡性基因破坏,评估单个和多个向部位.
- 开发了一种测序管道,从孤立的病毒基因组中检测gp64中的indel突变.
主要成果:
- 证明了 baculovirus 载体水平的降低,特别是在使用 p6.9 促销器用于外来蛋白质表达时.
- 对于大多数单导引RNA标,成功检测了gp64基因内的indel突变.
- 观察到68.8%的检测到的变异在病毒传播期间被保存,这表明对病毒健康的影响很小.
结论:
- CRISPR-Cas9短暂基因组编辑为修改baculovirus载体提供了一个可行的策略.
- 开发的变异调用方法可以检测目标基因的低频突变.
- 这种方法有可能提高百科病毒表达载体系统 (BEVS) 的效率和实用性.
