通过将酵母表面显示与化学标记和深度测序相结合,快速地绘制蛋白质结合位点和形状表皮

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 对抗原上抗体结合部位 (表位) 的精确映射对于开发有效的疫苗和抗体疗法至关重要.
• 像X射线结晶学和NMR这样的传统方法提供了原子分辨率,但是劳动密集型的,需要高度的蛋白质.
• 为了克服这些局限性,已经开发出一种新,快速和可靠的方法.

研究的目的:

• 为新型酵母表面显示方法提供详细的协议,用于快速表位图绘制.
• 为了能够有效地识别抗体结合部位,而不需要纯化蛋白质或结构信息.
• 证明该方法对各种显示格式和生物点的适用性.

主要方法:

• 利用一个感兴趣的蛋白质单个氨酸突变的面板,显示在酵母细胞表面.
• 用一种特殊的探针对暴露的氨酸残留物进行共价标记.
• 通过通过流细胞计和深度/桑格测序监测抗体结合损失,降低结合部位残留物.

主要成果:

• 成功确定了24个单克隆抗体和多克隆血清准的细菌毒素CcdB的表位.
• 证明埋藏的氨酸残留物没有标记,这有助于快速识别结合部位残留物.
• 这种方法即使在小型库大小和没有先前的蛋白质结构信息的情况下也被证明是有效的.

结论:

• 开发的酵母表面显示方法为表位图绘制提供了一个快速,可靠和可访问的方法.
• 这种技术显著减少了与传统结构生物学方法相关的限制.
• 该方法非常通用,适用于各种抗原和抗体类型,加速疫苗和治疗开发.