开发异热核酸放大技术,用于快速检测猪肠道病毒-G

科学领域:

• 兽医病毒学 兽医病毒学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 异热核酸放大器 核酸放大器

背景情况:

• 猪肠道病毒G (PEV-G) 由于各种疾病,在猪业中造成重大经济损失.
• 传统的诊断方法,如病毒隔离和RT-PCR是耗时的,需要专门的设备.
• 对于PEV-G来说,急需快速,灵敏和可在现场部署的诊断工具.

研究的目的:

• 开发和优化用于PEV-G检测的同热核酸放大试验.
• 评估复合聚合酶放大 (RPA) 和聚合酶螺旋反应 (PSR) 试验的灵敏度,特异性和现场适用性.
• 为PEV-G.提供一个经济有效和及时的诊断解决方案.

主要方法:

• 开发和优化重组酶聚合酶放大 (RPA) 和聚合酶螺旋反应 (PSR) 试验,以PEV-G多蛋白区域为目标.
• 确定最佳反应条件,包括温度,时间,原料度和离子度.
• 使用Picogreen染料进行视觉检测和对存档现场样本进行测试的测试的验证.

主要成果:

• RPA测定在20分钟内达到1.417×104副本的灵敏度;PSR测定在2.5小时内显示出2.3×105副本的灵敏度 (基于凝的检测).
• 使用Picogreen染料的视觉检测极限为RPA的14个副本和PSR的2.3个副本.
• 两种测定都表明PEV-G的高特异性,没有与其他猪病毒的交叉反应性,并且在现场样本上对常规PCR具有可比的敏感性.

结论:

• RPA和PSR是PEV-G检测的有效,快速和敏感的同热诊断工具.
• 这些测试适用于实验室和现场使用,为传统方法提供了切实可行的替代方案.
• 开发的测定方法可以显著帮助及时管理疾病,并减少猪业的经济损失.