加强在体外受精的牛胚胎中的基因表达研究:在具有不同发育速度的胚胎中识别稳定的参考基因
Sung-Ho Kim1, Sang-Yup Lee1,2, Saet-Byul Kim2
1College of Veterinary Medicine, Kyungpook National University, Daegu 41566, Republic of Korea.
The Journal of reproduction and development
|July 2, 2025
概括
选择适当的参考基因对于精确的牛胚胎基因表达分析至关重要. 不稳定的参考基因可能导致误解发育潜力和体外受精研究中的怀孕率.
科学领域:
- 生殖生物学 生殖生物学
- 分子生物学分子生物学
- 畜牧科学 畜牧科学 畜牧科学
背景情况:
- 试管婴儿 (IVF) 对于牲畜的繁殖至关重要,但胚胎发育速度会影响怀孕率.
- 定量PCR (qPCR) 用于评估胚胎潜力,但需要可靠的参考基因 (RG) 才能准确正常化.
- 基因基因稳定性的差异可能会显著影响牛胚胎囊中的基因表达数据的解释.
研究的目的:
- 在早期,中期和晚期发育的牛体外受精胚胎囊中确定稳定的参考基因以使qPCR数据正常化.
- 评估RG选择对关键发育标志物和妊娠率的准确评估的影响.
主要方法:
- 通过使用RefFinder,对8个候选参考基因 (18S,ACTB,GAPDH,HMBS,PPIA,TBP,HPRT1和SDHA) 的稳定性进行了评估,这些基因在牛胚胎细胞的不同发育速度组中具有稳定性.
- 分析了内部细胞质量 (OCT4,SOX2) 和皮 (CDX2,GATA3,IFNτ) 标记物的表达,使用各种RG进行正常化.
- 怀孕率在不同发育年龄组之间进行了比较.
主要成果:
- 鉴定出ACTB是最稳定的基因,而TBP是最不稳定的基因.
- 用稳定的RG ACTB进行正常化,结果与内细胞质量标志物的怀孕率一致.
- 不稳定的RG导致内部细胞质量标记的结果矛盾,而 trofhectoderm标记的结果不一致或被高估.
结论:
- 在牛胚胎研究中,选择适当的参考基因对于准确的qPCR分析至关重要.
- 不适当的基因组选择可能导致基因表达数据的误解,影响发展潜力和生殖结果的评估.
- 标准化对基因稳定性的评估是必要的,以确保牲畜试管婴儿试验的可靠结果.
