利用互补离子激活方法与质子转移电荷减少反应,全面描述单克隆抗体重链子单位的特征
Sean D Dunham1, Kyle J Juetten1, Jessica Hellinger1
1Department of Chemistry, University of Texas, Austin, Texas 78712, United States.
Analytical chemistry
|July 3, 2025
概括
这项研究使用混合质谱法提高了大型蛋白质的特征. 新方法改善了抗体和抗体药物合物的序列覆盖,使异构体的精确分化成为可能.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 大型蛋白质的自上而下的质谱学面临着低信号噪声比 (S/N) 和光谱拥堵的挑战.
- 质子转移电荷减小 (PTCR) 有助于光谱拥堵,但在低S/N的情况下扎,需要广泛的光谱平均.
研究的目的:
- 推进大型蛋白质的表征,包括单克隆抗体 (mAbs) 和抗体药物联合体 (ADCs).
- 在大蛋白质分析中克服S/N和光谱拥堵的局限性.
- 为了实现高序列覆盖率和区分复杂的生物制药结构.
主要方法:
- 实施一种混合策略,结合紫外线光解离 (UVPD),电子转移高碰撞能量解离 (EThcD) 和PTCR.
- 使用液态染色学时间尺度分析与有目的的染色学峰值扩大.
- 使用气相分化和补充激活方法.
主要成果:
- 在mAb重链 (Hc) 中实现了85%的高序列覆盖率,在ADC Hc子单元中达到79%.
- 成功分化了ADC Hc.的两个有效载荷位置异构体.
- 证明了大型蛋白质表征的混合战略的有效性.
结论:
- 开发的混合战略显著提高了大型蛋白质和复杂生物制药的表征.
- 这种方法克服了基于质谱的蛋白质分析的主要局限性.
- 允许精确的结构阐明和同位素分化,这对于生物制药开发至关重要.
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