使用可扩展组织凝中的密度标签,用于3D多重循环成像的高精度图像记录

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 显微镜的使用方法
• 分子成像学分子成像学

背景情况:

• 在可扩展组织凝中进行多重复合循环成像,以纳米级分辨率可视化生物分子.
• 稀有标签 (例如,DAPI) 已被用于注册,但未能捕获完整的样品变形.
• 不准确的注册限制了3D可扩展组织中纳米尺度成像的精度.

研究的目的:

• 开发一种密集标签策略,用于在3D多重循环成像中高精度的图像注册.
• 为了克服可扩展组织凝中的稀疏注册标记物的局限性.
• 为了实现纳米级精度的成像复杂的生物样本.

主要方法:

• 测试了NHS-ester功能化光体作为注册的信托标记.
• 在稀疏 (DAPI) 和密集 (NHS-ester) 标签之间比较注册准确性.
• 优化了实验条件,以减轻膨胀/收缩周期期间的3D非线性扭曲.
• 研究光漂白和计算脱色作为化学脱色的替代方案.

主要成果:

• 使用NHS-ester染色的基于密集标签的注册与DAPI相比显示出更高的准确性.
• 确定了适合用于3D多重循环成像的NHS-型光体.
• 展示了3D非线性扭曲的缓解策略,包括重新嵌入和替代信号移除方法.
• 在使用密集标签的扩展样本中实现了纳米级精确图像注册.

结论:

• 使用NHS-的密集标签为可扩展组织凝中准确的图像注册提供了强大的解决方案.
• 优化的实验协议有效地解决样本扭曲,提高成像可靠性.
• 这种密集标签策略预计将促进生物和医学研究中的多重循环成像应用.