通过酶化水解和LC-MS/MS的使用,研究过氧化物诱导的Asp46在过氧化素2中的表皮化
Mohamed Abdulbagi1, Limin Wang1, Jiafeng Wang1
1Department of Pharmaceutical Analysis, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China; Key Laboratory on Protein Chemistry and Structural Biology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China.
氨基酸立体反转,就像阿斯巴拉丁酸表皮化 (AAE) 一样,可以改变蛋白质功能. 这项研究在氧化应激后检测到D-Asp46在抗氧化酶Peroxiredoxin 2 (Prx2) 中,揭示了结合亲和力降低.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 氧化压力是一种氧化压力.
背景情况:
- 氨基酸立体反转 (L-到D-形式) 改变了蛋白质的结构和功能.
- 酸表皮化 (AAE) 是由自由基和过氧化物加速的.
- 在蛋白质分析中,由于质量与电荷比 (m/z) 没有变化,这种修改往往被忽视.
研究的目的:
- 开发一种用于选择性检测D-Asp46在Peroxiredoxin 2 (Prx2) 中的方法.
- 为了研究 tert-butyl 氧化物 (TBHP) 对 Prx2.2. 中 Asp46 的表皮化作用.
- 分析D-Asp46形成对Prx2结合亲和力的影响.
主要方法:
- 一个两步的酶性水解 (chymotrypsin 随后的aminopeptidase M).
- 液体染色学-并联质谱学 (LC-MS/MS) 用于选择性检测和量化.
- 从TBHP治疗细胞中分离的Prx2和分离的Prx2.2的分析.
主要成果:
- 在TBHP治疗后,在Prx2中的Asp46表现出时间依赖的表皮化.
- 从暴露于TBHP的红细胞 (RBC) 中分离的Prx2中观察到类似的表皮化.
- 表明D-Asp46在Prx2活性部位的形成降低了与其标蛋白的结合亲和力.
结论:
- 开发并验证了一种LC-MS/MS方法来检测Prx2.2.中的D-Asp46.
- 在Prx2.2.中确认了氧化驱动的Asp46的立体化学变化.
- 表明Prx2立体化学的变化可能会影响其在氧化应激中的功能.
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