一种验证病毒拷贝数试验的方法,涉及混合的安普利康和双重滴滴数字PCR

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 测试开发 测试开发

背景情况:

• 病毒拷贝数 (VCN) 测试对于评估病毒修饰细胞疗法至关重要.
• 目前用于合格和验证VCN测定的方法依赖于参考控制,如塑体或细胞系,这些是耗时和资源密集的开发.
• 需要更高效,更可靠的基准控制来验证VCN测定.

研究的目的:

• 引入和评估一种新的合成DNA片段,作为对VCN量化双重滴滴数字PCR (ddPCR) 试验的合格和验证的参考控制.
• 为了证明混合安普利康在评估关键测试性能特征中的实用性.
• 确立混合安普利康作为传统参考标准的可行替代品.

主要方法:

• 设计了一种合成DNA片段 (混合片),其中包含木肝炎病毒后转录调节元件 (WPRE) 和核糖核酶P蛋白子单元p30 (RPP30) 的片,通过HindIII限制部位连接在一起.
• 双重WPRE/RPP30 ddPCR试验使用混合安普利康来确定其量化范围,精度,偏差和稳定性的合格.
• 包括线性,变化系数 (CV) 和百分比恢复在内的测试性能指标使用不同的输入DNA量来评估.

主要成果:

• 混合型安普利康成功通过了双重WPRE/RPP30 ddPCR测定.
• 该试验证明了定义的量化,线性,可接受的精度 (CV) 和准确性 (%回收) 的上限和下限.
• 在经过测试的可变性条件下,混合动力安普利康被证明是稳健的,其性能与细胞参考标准相比.

结论:

• 该WPRE-RPP30混合放大器作为一个有效和可比的替代品,用于VCN测试验证的细胞参考标准.
• 这种合成DNA片段可以作为验证数字PCR测定质量控制措施的常规应用.
• 拟议的方法为VCN试验合格和验证提供了一种更有效和节约资源的方法.