化学交联对蛋白质和蛋白质组件结构的影响
Tamar Tayri-Wilk1, Nir Kalisman2,3, Uri Raviv1,2
1Institute of Chemistry, The Hebrew University of Jerusalem, Edmond J. Safra Campus, Givat Ram, 9190401 Jerusalem, Israel.
甲 (FA) 交叉链接显著改变蛋白质结构,不同于 bis (sulfosuccinimidyl) 亚基酸盐 (BS3). 小角度X射线散射 (SAXS) 证实FA诱导聚合,突出BS3作为结构生物学研究的首选.
科学领域:
- 结构生物学 结构生物学
- 生物化学 生物化学
- 生物物理学的生物物理.
背景情况:
- 化学交联对于蛋白质稳定和结构分析至关重要,通常与质谱学 (XL-MS) 相结合.
- 一个关键的假设是,交联试剂不会显著改变蛋白质结构.
- 常见的交叉链接剂,二硫胺基亚酸盐 (BS3) 和甲 (FA) 对蛋白质结构的影响需要直接调查.
研究的目的:
- 直接评估化学交联试剂对蛋白质的结构影响.
- 为了比较 bis ((sulfosuccinimidyl) suberate (BS3) 和甲 (FA) 对各种蛋白质系统的影响.
- 评估交叉链接方法适用于结构生物学应用的适用性,使用小角度X射线散射 (SAXS).
主要方法:
- 从用交叉链接器处理的蛋白质样本中监测时间过程中小角度X射线散射 (SAXS) 信号.
- 在从细丝到球状蛋白质的各种蛋白质系统中研究 bis (sulfosuccinimidyl) suberate (BS3) 和 formaldehyde (FA).
- 进行随行交叉链接与质谱学 (XL-MS) 分析,以证实SAXS的发现.
主要成果:
- 双硫胺基) 亚酸盐 (BS3) 交联并没有诱导测试蛋白质的显著结构变化.
- 甲 (FA) 在所有研究系统中诱导了快速和实质性的结构变化,包括蛋白质聚合.
- FA的结构影响取决于剂量,较低度 (0.1重量%) 显示较轻的效应.
结论:
- 在结构研究中,建议使用NHS化学 (如BS3) 在甲 (FA) 上进行溶液交叉链接.
- 当需要FA时,降低其度至关重要,以最大限度地减少结构扰动.
- 小角度X射线散射 (SAXS) 是在交叉链接后验证结构完整性的宝贵工具.
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