一种高灵敏度的qPCR方法,用于检测狂犬病疫苗生产中的残留Vero细胞DNA
María P Almario1, Jorge Rivera1, Catalina Páramo1
1Empresa Colombiana de Productos Veterinarios VECOL S.A., Bogotá, Colombia.
Journal of virological methods
|July 11, 2025
概括
一种新的定量PCR (qPCR) 试验准确地测量了狂犬病疫苗中的残留Vero细胞DNA. 这种经过验证的方法通过精确量化DNA污染物来确保疫苗的安全性和监管合规性.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 疫苗开发 疫苗开发
背景情况:
- 生物制品中的残留宿主细胞DNA构成安全风险.
- 精确的DNA量化对于监管合规至关重要.
- 维罗细胞通常用于疫苗生产,需要对残留DNA进行监测.
研究的目的:
- 开发和验证一种定量PCR (qPCR) 试验,用于检测和量化残留的Vero细胞DNA.
- 确保狂犬病疫苗配方的安全性和监管合规性.
- 为疫苗制造提供强大的质量控制方法.
主要方法:
- 开发一种基于SYBR绿色的qPCR测定方法,针对Vero细胞特异性α卫星DNA.
- 验证测试的特异性,灵敏性,线性,精度和稳定性.
- 使用经认证的基因组DNA标准进行方法评估.
主要成果:
- 该试验表现出高特异性,没有从非目标DNA中放大.
- 具有广泛的线性动态范围 (0.064-1000 ng/mL,R2>0.999) 和高放大效率 (96.3%).
- 量化界限为0.31 ng/mL,远低于10 ng/剂量监管值,具有低可变性 (CV < 20%) 和高精度 (93.33-117.33%的恢复).
结论:
- 经过验证的qPCR方法对于监测残留的Vero细胞DNA具有敏感性,特异性和可重复性.
- 这种测试支持狂犬病疫苗生产中的强有力的质量控制.
- 该方法确保符合生物产品严格的监管安全标准.
