使用FcBAR改善复合抗体生产:一种用于检测和放大蛋白质与蛋白质相互作用的现场方法

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 重组蛋白质,特别是单克隆抗体,是哺乳动物细胞产生的关键治疗药物.
• 了解蛋白质分泌途径中的宿主细胞机械对于优化生产至关重要,但仍然不完整.
• 由于宿主细胞蛋白相互作用中的未知瓶,生产失败经常发生.

研究的目的:

• 开发和应用一种新的方法,Fc向抗体识别生物化 (FcBAR),用于*in situ*检测涉及Fc域载重组蛋白的蛋白质与蛋白质相互作用 (PPI).
• 识别与重组抗体生产水平相关且影响的宿主细胞蛋白质和相互作用.
• 为提高生物治疗药物和生物类似药物的生产战略提供指导.

主要方法:

• FcBAR涉及透细胞,并将它们与与胡卜氧化酶结合的抗Fc抗体进行化.
• 相互作用的蛋白质被生物化,拉下来,并使用质谱学识别.
• 该方法应用于生产Rituximab的中国仓鼠卵巢 (CHO-S) 克隆,并结合RNA-Seq分析.

主要成果:

• 在Rituximab生产的CHO-S细胞中,FcBAR成功检测到PPI.
• 分析显示,特定的PPI与rituximab分泌水平正相关.
• 三个已识别的基因 (AGPAT4,EPHX1和NSDHL) 的过度表达显著增加了rituximab的产量.

结论:

• FcBAR提供了一种不偏见的方法来测量支持复合抗体生产的PPI *in situ*.
• 这种方法可以识别影响生物治疗生产的关键宿主细胞因素.
• 通过基因操纵准已识别的瓶,可以提高生物治疗药物和生物类似药的产量.