在一个人性化的小鼠中,模拟由腺相关病毒载体6介导的活体基因传递到来自输血依赖性thalassemia患者的扩大非流动化造血干细胞的模型

科学领域:

• * 基因治疗 基因治疗
• * 血液学 血液学
• * 病毒学 病毒学

背景情况:

• * 造血干细胞 (HSC) 是基因修饰疗法 (GMT) 的关键标,用于治疗诸如β-hemoglobinopathies等遗传疾病.
• *目前的ex vivoGMT方法面临着可访问性,骨髓移动相关的发病率和成本方面的挑战.
• *使用单链腺相关病毒载体 (ssAAV) 的体内GMT提供了一个替代方案,但有效载荷限制阻碍了大型基因或基基编辑器的传递.

研究的目的:

• * 通过双ssAAV6策略来研究体内HSC向的可行性.
• * 评估提供分割内置编辑工具的潜力,以克服ssAAV有效载荷限制.
• * 评估HSC中体内ssAAV6-介导基因修饰的效率和长期持续性.

主要方法:

• *从β-thalassemic患者的人类HSC植入NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ小鼠中.
• *使用编码GFP和mCherry的双ssAAV6载体 (5E+12个基因组/公斤).
• *分析循环和嵌套的HSC种群中的转基因表达,随后进行二次移植实验.

主要成果:

• *在循环hCD45+细胞中,单个转基因表达达达到了1.96 - 10.17%的峰值,双转基因表达达达到了31.77%.
• *在各种器官的嵌套HSC中显示出显著的单转基因表达 (36.13-68.14%) 和双转基因表达 (21.91-59.44%).
• *二次移植证实了AAV6转化HSC的长期持久性,转基因表达持续 (9.19-60.72%).
• * 在接受治疗的小鼠中观察到最小的促炎细胞因子表达.

结论:

• * 这项研究表明,在体内,ssAAV6介导的塔拉塞米HSC的有效向.
• *双AAV策略对于基因编辑是可行的,为长期植入修改后的HSC提供了潜力.
• * 这种体内方法为beta-hemoglobinopathies的体外GMT提供了一个有希望的替代方案.