离子配对水友相互作用染色学用于治疗性酸酸寡核酸的杂质概况

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物制药学分析
• 染色体学 染色体学是什么

背景情况:

• 治疗性寡核酸 (ON) 通常含有密切相关的杂质,这些杂质很难使用传统液态染色学 (LC) 来分离.
• 准确的杂质分析对于基于寡核酸的治疗药物的安全性和有效性至关重要.
• 现有的与质谱学 (MS) 兼容的LC方法难以将杂质与主要产品的质量差异最小化.

研究的目的:

• 为了研究离子配对的水友互动液态色谱 (IP-HILIC) 作为一种替代性MS兼容LC模式用于寡核酸杂质分析.
• 评估离子配对试剂 (IPR) 水性,剂pH值和柱体温度对核酸分离的IP-HILIC性能的影响.
• 为了证明IP-HILIC能够解决具有挑战性的寡核酸杂质,例如去胺变体的能力.

主要方法:

• 开发并优化了一种IP-HILIC方法,使用模型16-mer反意义寡核酸 (全长产品;FLP) 和其潜在杂质 (更短,更长,PS-PO转化,除 [DA] 和非结合 [NC]).
• 研究了IPR疏水性,剂pH值和柱体温度对分离选择性的影响.
• 采用的特定条件:25 mM三乙烯酸乙烯 (pH 6.3) 和80 °C的柱体温度,以溶解DA杂质.

主要成果:

• IPR减少了酸盐部分对保留的贡献,增强了基于核基和结合群的选择性.
• 虽然用三乙烯胺的聚乙烯 (dT) 梯子的峰值容量下降,但对酸 (PS) ONs.观察到更好的分离.
• 优化的IP-HILIC方法成功地消除了FLP和非结合性FLP (NC-FLP) 的脱胺 (DA) 杂质,这是目前1DLC-MS方法无法实现的壮举.

结论:

• IP-HILIC是一种有希望的MS兼容的LC技术,用于解决具有挑战性的寡核酸杂质,包括那些质量差小于1Da的杂质.
• 与传统的LC模式相比,该方法为寡核酸杂质分析提供了更好的选择性.
• 这种方法具有显著的潜力,可以提高治疗性寡核酸的质量控制和表征.