铁编辑通常会增加自标签标签上的罗达胺染料的光稳定性
Jing Ling1, Yuan Zhang2, Yongzhen Hei3
1Peking-Tsinghua Center for Life Science, Academy for Advanced Interdisciplinary Studies, Peking University, Beijing 100871, China.
概括
研究人员发现,光体附近的乙烯基组降低了自我标记蛋白质标签中的光稳定性. 修改标签,如HaloTag:M175L,增强了高级生物成像和时间延迟研究的光稳定性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 生物物理学的生物物理.
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 自标记蛋白质标签对于生物成像至关重要,高光子预算染料的性能优于光蛋白.
- 增强染料标签系统光子发射是生物成像研究的一个关键目标.
- 了解蛋白质微环境对光体光稳定性的影响至关重要.
研究的目的:
- 为了研究近接乙烯基组对染料标签系统光稳定性的负面影响.
- 开发新型的自我标签标签,以提高用于先进成像的光稳定性.
- 确定提高生物成像应用中的光性能的策略.
主要方法:
- 在不同的自标签标签 (HaloTag,SNAP标签,TMP标签3) 上对罗达染料光稳定性的比较分析.
- 使用SuFEx点击化学来避免thioether adducts的修改TMP标签 (TMP-tag3.1) 的开发.
- 针对HaloTag (HaloTag:M175L) 的位点定向突变,以改变光体微环境.
- 使用单分子,活细胞和电压成像技术来证明增强的光稳定性.
主要成果:
- 在SNAP标签和TMP标签中的近接乙烯组对罗达胺染料的光稳定性产生负面影响.
- TMP-tag3.1通过替换乙烯链接,实现了与HaloTag相似的光稳定性.
- HaloTag:M175L突变增强了红色和远红色罗达胺的光稳定性,高达四倍.
- 在HaloTag中甲因的光氧化证实了乙烯途径在光漂白中的作用.
结论:
- 自标签标签中的thioether链接对光的光稳定性有害.
- 通过去除或修改乙烯组来工程蛋白质标签是一种可行的策略,以提高光稳定性.
- 修改后的自我标签标签,特别是HaloTag:M175L,为先进的时差生物成像提供了显著的改进.
