在埃舍里奇亚大肠杆菌中,来自SARS-CoV-2的五种重新折叠的RBD复合变异的功能表达
Ezequiel Tobón1, Lidia Riaño-Umbarila2, Humberto Flores3
1Laboratorio de Bioquímica Estructural, Departamento de Medicina Molecular y Bioprocesos, Instituto de Biotecnología, Universidad Nacional Autónoma de México, Cuernavaca, México.
细菌生产SARS-CoV-2受体结合域 (RBD) 变体是可行的. 这种方法产生了能够与人类ACE2结合的RBD变体,为COVID-19研究和变体跟踪提供了负担得起的替代方案.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 产生SARS-CoV-2受体结合域 (RBD) 变体对于理解与人类ACE2的相互作用和开发COVID-19策略至关重要.
- 像大肠杆菌这样的负担得起的细菌生产系统具有潜力,但在二硫化物键形成,溶解性和糖化处理方面面临挑战.
研究的目的:
- 为了证明在大肠杆菌中产生功能性SARS-CoV-2 RBD变体的可行性.
- 为了比较细菌产生的RBD变体与真核细胞产生的ACE2结合亲和力.
主要方法:
- 在大肠杆菌BL21中表达了五种代表性的RBD变异 (武汉,三角洲,奥米克朗BA.2,JN.1).
- 纳入体的溶解,使用氧化还原缓冲和L-氨酸重新折叠,并通过大小排除色谱进行净化.
- 使用表面等离子体共振 (SPR) 分析ACE2结合亲和力,并与CHO产生的RBD进行比较.
主要成果:
- 成功地从大肠杆菌包容体中生产和净化了多种SARS-CoV-2 RBD变体.
- 细菌产生的RBD变种与真核细胞产生的对应物表现出可比的ACE2结合亲缘关系.
- 再折叠策略有效地解决了二硫化物键形成和溶解性的挑战.
结论:
- 细菌表达SARS-CoV-2 RBD变种是一种可行的和潜在的成本效益的方法.
- 这种方法为研究人员提供了一种可访问的工具,用于研究RBD-ACE2相互作用和新兴变异.
- 开发的战略增强了COVID-19研究实验室的现有资源.
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