使用FcBAR改善复合抗体生产:一种现场方法来检测和放大蛋白质-蛋白质相互作用

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 重组蛋白疗法,特别是单克隆抗体,是重要的生物制药.
• 它们在哺乳动物细胞中的产生依赖于蛋白质分泌途径内的复杂宿主细胞机械.
• 涉及的宿主细胞蛋白质的完整组合及其在生产力中的作用仍然不完全理解,阻碍了优化.

研究的目的:

• 开发和应用一种新的方法,Fc向抗体识别生物化 (FcBAR),用于现场检测与重组蛋白生产相关的蛋白质-蛋白质相互作用 (PPI).
• 为了确定影响复合抗体生产水平的宿主细胞因素.
• 为加强生物治疗和生物类似产品的生产提供战略.

主要方法:

• 开发了FcBAR技术,该技术使用与胡卜素过氧化酶结合的抗Fc抗体,用于在现场检测具有Fc域载重组蛋白的PPI.
• 将FcBAR应用于生产Rituximab的中国仓鼠卵巢 (CHO-S) 细胞克隆,其生产率各不相同.
• 结合FcBAR分析与RNA测序 (RNA-Seq) 数据,以确定与高抗体分泌相关的PPI.

主要成果:

• 在Rituximab生产的CHO-S细胞中,FcBAR成功检测到PPI.
• 分析显示,特定的蛋白相互作用与增加的利图西马布分泌有正相关.
• 三种已识别的宿主细胞蛋白质 (AGPAT4,EPHX1和NSDHL) 的过度表达导致rituximab生产的显著增加.

结论:

• FcBAR是一种有效的,公正的方法来测量支持局部复合抗体生产的PPI.
• 已识别的宿主细胞蛋白 (AGPAT4,EPHX1,NSDHL) 是提高生物治疗生产的关键标.
• 这种方法可以指导战略,以克服生物治疗药物和生物类似药的生产瓶.