在Aspergillus fumigatus中使用CRISPR/Cas9和内源的反选择性标记物同时进行多基因整合

科学领域:

• 菌类学 菌类学是指菌类学.
• 分子生物学分子生物学
• 基因工程是一种基因工程.

背景情况:

• 克里斯普尔/Cas9彻底改变了基因组编辑,使得精确的基因修改成为可能.
• 可选择的标记物对于识别成功编辑的细胞至关重要.
• 之前的多基因集成方法在Aspergillus fumigatus中由于序列转换而耗时.

研究的目的:

• 开发一种精简的方法,用于在Aspergillus fumigatus中同时进行多基因集成.
• 为了利用CRISPR/Cas9和内源性反选择性标记物进行高效的基因操纵.

主要方法:

• 结合CRISPR/Cas9与三种内源的可反选择标记 (azgA,fcyB,cntA) 进行同时的磁带集成.
• 使用的标记物在营养吸收中的作用,用于三重选择性转化.
• 引入光报告器来监测耐醇分离物的生长模式.

主要成果:

• 在A. fumigatus.中成功实现了三个表达盒的同时基因组集成.
• 证明了一种三重选择性转换过程.
• 视觉化和监控的增长工程真菌分离物与不同的抗真菌耐药性.

结论:

• 开发的技术显著减少了在真菌中进行基因操纵的时间和劳动力.
• 允许在单个步骤中灵活有效地引入多个遗传特征.
• 促进了真菌遗传工程应用的快速有效的多基因集成.