开发和验证一种用于分析细胞中的D/L-氨酸的敏感测定方法,使用超高性能液态染色学光检测器进行分析

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• D-胺是一种重要的神经调节剂,其失调与神经系统疾病有关.
• 在细胞环境中精确量化奇拉D/L-氨酸对于理解其生物作用和代谢途径至关重要.

研究的目的:

• 开发一种简单,灵敏,强大的超高性能液体染色学与光检测 (UPLC-FLD) 方法相结合的方法,用于在细胞中确定奇拉D/L-氨酸.
• 在不同细胞系中量化D/L-血清水平.

主要方法:

• 在细胞中使用o-phthalaldehyde (OPA) 和N-乙-L-氨酸 (NAC) 来衍生出细胞中的Chiral D/L-serine.
• 碳水化合物被用作内部标准.
• 在C18柱上使用梯度化与光检测在分别为340nm和450nm的激发/发射波长上实现了分离.

主要成果:

• 该方法实现了D-氨酸和L-氨酸的完美分离,保持时间分别为23.3分钟和23.9分钟.
• 精度在95.50%至109.63%之间,精度在3.56%至14.56%之间.
• 对于D-氨酸和L-氨酸,量化极限为0.1nmol/mL.
• 在不同的细胞系中,D/L-氨酸度有所不同.

结论:

• 成功建立了一种简单,稳定,可靠和强大的UPLC-FLD方法,用于在细胞中确定D/L-氨酸.
• 该方法适用于在星球细胞和其他细胞类型中分析D/L-氨酸.
• 量化D/L-氨酸水平为研究D/L-氨酸代谢和细胞中的相关机制提供了宝贵的参考.