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Updated: Jul 14, 2026

21:08
Engineering Cell-permeable Protein
Published on: December 28, 2009
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重组细胞透性普罗米辛N-乙转移酶通过直接蛋白质转导赋予了普罗米辛耐药性
Jiwon Choi1, Kyung-Hee Cho1, Jiwon Im1
1Department of Life Science, Gachon University, Sungnam, Gyeonggido 13120, Republic of Korea.
Journal of microbiology and biotechnology
|July 29, 2025
概括
纯氨酸N-乙转移酶 (PAC) 与细胞透 (TAT) 融合,可以直接将蛋白质输入哺乳动物细胞. 这种TAT-PAC蛋白质赋予了菌素耐药性,为基因编辑和治疗提供了一种新的选择方法.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 纯米素N-乙转移酶 (PAC) 赋予了纯米素耐药性,通常被用作基因转移中的可选择标记物.
- 细胞透性 (CPPs),就像转录 (TAT) 序列的HIV-交易激活剂一样,促进细胞内载荷分子的传递.
- 传统方法依赖于可选择标记物的遗传集成,这可能是低效和耗时的.
研究的目的:
- 研究TAT-PAC融合蛋白对哺乳动物细胞细胞内传递和菌素耐药性的疗效.
- 探索一种非遗传方法,使用细胞透蛋白来赋予胺素耐药性.
- 评估TAT-PAC作为联合递送的治疗性或基因编辑蛋白的选择标记物的潜力.
主要方法:
- 再组合的TAT-PAC蛋白在大肠杆菌中得到表达,并被净化.
- 确定了纯化的TAT-PAC的酶活性.
- 细胞内传递使用RFP标记的TAT-PAC可视化,并通过共聚焦显微镜和流细胞计验证.
- 细胞活力测定是在菌素存在的情况下用TAT-PAC治疗的HEK293和SY5Y细胞上进行的.
主要成果:
- 纯化的TAT-PAC蛋白显示出显著的酶活性 (197nmol/min/mg).
- 对焦显微镜和流细胞计证实了TAT-PAC.的细胞内吸收.
- 用TAT-PAC治疗的HEK293和SY5Y细胞在含氨酸的介质中显示出增强的存活率.
- 在哺乳动物细胞中,TAT-PAC有效地作为可选择的标记物起作用.
结论:
- 细胞透性TAT-PAC蛋白可以成功地被输入哺乳动物细胞.
- TAT-PAC赋予了普罗米辛耐药性,证明了其作为非遗传选择标记物的潜力.
- 这种方法提供了一个有希望的替代选择细胞接受联合交付治疗或基因编辑蛋白质.

