通过CRISPR-Cas12a/RPA双读取测试,可通过可视化快速检测猪类罗塔病毒

科学领域:

• 兽医诊断 兽医诊断 兽医诊断 兽医诊断
• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 猪类罗塔病毒 (PoRV) 引起小猪的新生儿腹,导致猪业的经济损失很大.
• 现有的诊断方法往往需要专门的设备,限制在资源有限的环境中使用它们.
• 对于PoRV监测而言,急需的是快速,可访问和现场部署的诊断工具.

研究的目的:

• 开发一种基于CRISPR/Cas12a的新型测定方法,与复合酶聚合酶放大 (RPA) 集成,用于可视检测PoRV.
• 创建一个便携式和具有成本效益的诊断平台,适合资源有限的环境.
• 加强对猪群的兽医卫生管理和疾病监测.

主要方法:

• 开发了一个针对PoRV保存的VP6基因的CRISPR/Cas12a系统.
• 重组酶聚合酶放大 (RPA) 为快速核酸放大进行了优化.
• 基于Cas12a的附带裂解活动,使用光和侧流量测量棒 (LFD) 实现了双读出检测.

主要成果:

• 该试验在1小时内达到10^2副本/μL的检测极限.
• 没有观察到与相关的猪病原体,如传染性胃肠炎病毒 (TGEV) 的交叉反应.
• 该平台可在现场设置中部署,不需要热循环器或专用设备.

结论:

• 开发的CRISPR/Cas12a-RPA试验为PoRV检测提供了一个强大的,具有成本效益的,便携式的解决方案.
• 这种分散的诊断平台解决了在资源有限的环境中迫切需要可访问的诊断.
• 该测定有助于及时监测PoRV,并改善猪生产的兽医卫生管理.