TRIM5α/循环菲林A修饰的MDBK细胞用于基于lentiviral的基因编辑

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 分子生物学分子生物学
• 基因编辑 基因编辑

背景情况:

• 病毒载体对于基因改造至关重要,但在马丁-达比牛 (MDBK) 细胞中表现出有限的效率.
• 像TRIM5α这样的HIV-1限制因子,在某些细胞类型中阻碍了lentiviral感染.

研究的目的:

• 为了提高MDBK细胞中的lentiviral基因修饰效率.
• 为了研究TRIM5α和环素A (CypA) 在限制牛细胞中的病毒感染中的作用.

主要方法:

• 使用siRNA对TRIM5α的耗尽,以评估其对lentiviral感染的影响.
• 产生一种可诱导多西环素的Cas9过度表达的MDBK细胞系 (MDBK-iCas9).
• 在MDBK-iCas9细胞 (MDBK-iCas9^TRIM5α-/-) 中通过sGRNA转染和单细胞克隆对TRIM5α进行CRISPR/Cas9介导的淘汰.
• 用环素A治疗,以评估其对lentiviral感染性的影响.

主要成果:

• 在MDBK细胞中,TRIM5α的减少显著增强了HIV-1感染.
• 与野生类型 (MDBK-WT) 细胞相比,MDBK-iCas9^TRIM5α-/-细胞系对lentivirus的容许性增加.
• 环素A治疗显著增加了TRIM5α淘汰和野生类型MDBK细胞中的lentiviral感染力,表明CypA独立于TRIM5α作为抑制剂.
• 结合TRIM5α和CypA的向显示了显著增强lentiviral感染的潜力.

结论:

• 牛的TRIM5α和CypA是MDBK细胞中lentiviral感染的关键抑制剂.
• 针对TRIM5α和CypA提供了一种强有力的策略,以提高牛细胞中lentiviral转导的效率.
• 这种方法为研究牛病毒与宿主相互作用以及在牛细胞系统中推进基因工程提供了有价值的工具.