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Updated: Sep 13, 2025

Dual-Color Fluorescence Cross-Correlation Spectroscopy to Study Protein-Protein Interaction and Protein Dynamics in Live Cells

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Published on: December 11, 2021

使用FCCS与绿色和近红外光蛋白进行循环-CDK离合常数的量化

Aika Toyama^1,2,3,4, Yuhei Goto^1,2,3,4,5, Yuhei Yamauchi⁶

¹Basic Biology Program, Department of Advanced Studies, Graduate Institute for Advanced Studies, The Graduate University for Advanced Studies, SOKENDAI, 5-1 Higashiyama, Myodaiji-cho, Okazaki, Aichi 444-8787, Japan.

Journal of cell science

|July 31, 2025

概括

在活细胞中量化环素-CDK相互作用对于理解细胞循环调节至关重要. 这项研究引入了一种新的光蛋白对用于光交叉相关谱学 (FCCS),使得可以精确地测量Kd的环林-CDK复合体.

科学领域:

细胞生物学细胞生物学
生物物理学的生物物理.

背景情况:

细胞循环是由与环林相互作用的环林依赖激酶 (CDK) 调节的.
在体内不完全了解环素-CDK复合物的解离常数 (Kd).
光交叉相关谱学 (FCCS) 可以量化这些相互作用,但需要合适的光探针.

研究的目的:

在活细胞中确定FCCS的最佳光蛋白对.
在裂变酵母和哺乳动物细胞中测量环林-CDK复合物的Kd值.
探索细胞循环调节中的环林-CDK相互作用的多功能性.

主要方法:

使用了mNeonGreen和与基亚诺贝林结合的miRFP670,为光稳定性和低流血率而选择.
采用FCCS来量化活生生的裂变酵母细胞中的解离常数 (Kd).
哺乳动物细胞中36个环林-CDK复合体的估计Kd值.

主要成果:

mNeonGreen和miRFP670在活细胞中显示出适合使用FCCS.
在裂变酵母中成功测量了Cdc2-Cdc13复合物的Kd值.
提供了哺乳动物细胞中众多环素-CDK对的估计,揭示了潜在的结合多功能性.

结论:

开发的光探针系统对FCCS对环林-CDK相互作用的测量非常有效.
这些发现表明,在真核生物中细胞周期控制中,环林-CDK相互作用的作用更为广泛.
这项工作促进了对细胞循环调节机制的进一步研究.

关键词:

在CDK CDK中.赛克林 (Cyclin) 是一种循环材料.美国FCCS系统在FCS中使用FCS.在IRFP的基础上,IRFP可以

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