通过使用CRISPR/Cas12a-Coupled Nested PCR进行超敏感的eccDNA检测用于瘤诊断

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 在瘤学瘤学.

背景情况:

• 外染色体圆形DNA (eccDNA) 是用于癌症检测的新型生物标志物.
• 生物流体中的少量含量和缺乏可靠的检测技术阻碍了临床应用.

研究的目的:

• 查与瘤相关的eccDNA生物标记物.
• 开发一种新的超敏感检测方法,用于液体活检中的eccDNA.

主要方法:

• 开发了NPCC (嵌套PCR-CRISPR/Cas12a) 的测试方法.
• 结合嵌套PCR用于eccDNA放大与CRISPR/Cas12a用于特定序列检测.
• 通过合成标准和88名癌症患者的血样本进行验证.

主要成果:

• 达到10-6 fM的检测极限,比传统PCR提高100倍以上.
• 没有证明与线性或基因组DNA的交叉反应.
• 在肝细胞癌患者中成功检测出瘤特异性eccDNA,包括eccDNA-HCC-1 (AUC = 0.8977).

结论:

• NPCC克服了液体活检中的关键技术障碍,以检测eccDNA.
• 为非侵入性癌症诊断提供了一个具有成本效益,高度敏感和特定的平台.