为Trichoderma aggressivum的基因组工程提供了一个工具箱

科学领域:

• 菌类学 菌类学是指菌类学.
• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 特里科德尔玛侵袭性菌在Agaricus bisporus中引起绿色菌病,影响食用真菌的产量.
• 尽管T. aggressivum具有致病作用,但它仍有可能作为生物控制剂和植物生长促进剂.
• 需要有效的分子操纵工具来研究T. aggressivum的生物学.

研究的目的:

• 开发Trichoderma aggressivum的转化协议,使用等离子体DNA进行子宫外整合.
• 建立一种基于Cas9-核糖核蛋白 (RNP) 的方法,用于T. aggressivum.的基因组编辑.
• 为了验证Trichoderma reesei的hph和pyr4基因作为有效的选择标记物.

主要方法:

• 宫外整合hph基因以确定转化效率.
• 通过CRISPR-Cas9调解,破坏了ornithine-5'酸盐脱碳酶基因.
• 在CRISPR目标位点周围测序基因组位点,以确认基因破坏.
• 验证pyr4基因作为生成的auxotrophic菌株中的选择标志物.

主要成果:

• 使用等离子体DNA成功转化了T. aggressivum.
• 通过CRISPR-Cas9 RNP系统证明了基因组编辑能力.
• 确定了四种候选菌株,具有尿素辅和5-FOA耐药性.
• 证实了hph和pyr4基因作为选择标记物的适用性.

结论:

• 已经建立了一个强大的基因转换和基因组编辑协议,用于T. aggressivum.
• 开发的方法为研究T. aggressivum的真菌寄生虫和二次代谢物研究的研究人员提供了必不可少的工具.
• 这些进展促进了对T. aggressivum的生物机制和生物技术潜力的更深入的研究.