通过高通量RedAm检测试验实现的减少性氨基酶中关键残留物的功能映射
Jinming Xing1, Georgie Orderley1, Ruth T Bradshaw Allen1
1Institute of Pharmaceutical Science, Franklin-Wilkins Building, King's College London, 150 Stamford Street, London SE1 9NH, United Kingdom.
JACS Au
|August 1, 2025
概括
一种新的高吞吐量测定方法RedAm detect,可以快速选用于奇拉胺生产的酶. 该方法通过快速识别改善酶功能和基质特异性的关键氨基酸残留物,加速工业应用的酶工程.
科学领域:
- 生物催化和酶工程 生物催化和酶工程
- 合成化学 合成化学
- 高通量选 高通量选
背景情况:
- 酶性还原性氨基化提供了一条可持续的途径,以获得对药品和精细化学品至关重要的奇拉氨基.
- 目前的酶工程依赖于缓慢,昂贵的选方法,阻碍了工业应用的发展.
- 优化单个酶候选物对于广泛适用性来说是低效的.
研究的目的:
- 开发一种多功能,高通量光谱/色谱测定法,用于监测氨酶活性.
- 为了使酶库能够快速选改进的还原性氨基化催化剂.
- 确定影响减少性氨酶 (RedAms) 催化功能和基质特异性的关键残留物.
主要方法:
- 开发RedAm检测测试剂,将产品形成与氨基氧化酶-HRP报告员系统相合.
- 在492/498nm处对彩色染料形成的光谱测量监测,以量化酶活性.
- 测试的应用用于选减少性氨酶 (RedAms),氨基脱酶 (AmDHs) 和氨基酸脱酶 (AADHs) 的和点图书馆.
主要成果:
- 该RedAm检测试验成功监测了RedAms,AmDHs和AADHs催化的还原性氨化反应.
- 对56个位点和库的选确定了BacRedAm中10个关键残留物,这些残留物对催化功能和基质特异性至关重要.
- 通过向特定残留物来识别高达7倍改善活性的突变物,证明了工程基质特异性的潜在"通用"热点.
结论:
- 红检测试剂提供了一种快速,可靠和具有成本效益的方法,用于对氨酶活性进行高通量选.
- 这项工作为在 RedAms 中在酶家族层面绘制序列-活性关系奠定了基础.
- 这些发现促进了可预测,更快,更具成本效益的RedAms工程,用于各种工业应用.
