高通量单克隆抗体片映射使用15秒的HPLC梯度与周期性离子移动性质谱相结合
Devin M Makey1, Brandon T Ruotolo1, Robert T Kennedy1,2
1Department of Chemistry, University of Michigan, Ann Arbor, Michigan 48109, United States.
Analytical chemistry
|August 1, 2025
概括
这项研究引入了一种使用循环离子流动性质谱学 (LC-cIM-MS) 快速液体色谱的快速基映射技术,用于分析单克隆抗体 (mAbs). 该方法显著提高了关键质量属性 (CQA) 分析的吞吐量,加速了治疗开发.
科学领域:
- 生物化学和生物物理学
- 分析化学 分析化学
- 制药科学 制药科学
背景情况:
- 对于单克隆抗体 (mAb) 的安全性和有效性来说,精确地表征关键质量属性 (CQAs),如序列变异和后翻译修饰 (PTMs),至关重要.
- 传统的用液态染色体质谱法 (LC-MS) 绘制的图提供了同时的CQA监测,但缺乏快速分析的吞吐量.
研究的目的:
- 为全面的mAb分析开发高通量片映射工作流.
- 为了能够在mAb治疗中快速和高分辨率地对CQA进行表征.
主要方法:
- 实施一个多维的,高通量映射工作流程,将快速液体染色学 (LC) 与循环离子移动性质谱学 (cIM-MS) 结合起来.
- 使用了15秒的LC梯度与单通cIM-MS相结合,用于分析mAbs.的三性消化物.
- 员工移动调整的碰撞诱导解离,用于精确定位PTMs.
主要成果:
- 达到490的峰值容量,并在37分钟内分析了96个井板,证明了高吞吐量.
- 获得了97%的序列覆盖率,在保留时间,到达时间和峰值强度方面具有强大的可重复性.
- 证明了近两个数量级的线性动态范围,并在强制降解过程中成功跟踪了PTM动力学.
结论:
- 快速的LC-cIM-MS平台提供了一个强大的和有效的方法来评估高通量应用中的CQAs,如稳定性研究和过程监控.
- 这种方法有可能通过更快的分析来显著加速mAb的开发和制造.
- 突出了快速多维分离对于复杂的生物样本分析的实用性.


