基于重组酶介导的磁带交换的CRISPR激活查在中国仓鼠卵巢细胞中发现了高透性抗压基因
Minhye Baek1, Seokchan Kweon2, Yujin Kim2
1Department of Biological Sciences, KAIST, Daejeon 34141, Republic of Korea.
ACS synthetic biology
|August 1, 2025
概括
克里斯普尔激活查发现了基因,这些基因在高度应激下改善了中国子卵巢细胞的生长. 激活Siah2或C2cd4a增加了双特异性抗体的产生,增强了治疗性蛋白质的制造.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 基因工程是一种基因工程.
背景情况:
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞对于治疗性蛋白质生产至关重要.
- 在食批量培养过程中,超的压力会损害CHO细胞的生长和生产力.
- 需要新的策略来增强CHO细胞对压力的弹性.
研究的目的:
- 确定在CHO细胞中赋予对超体应激的抵抗性的基因.
- 发现新的目标,用于设计耐压性CHO细胞系.
- 改善CHO细胞中的双特异抗体 (bsAb) 生产.
主要方法:
- 全基因组CRISPR激活 (CRISPRa) 选在bsAb产生CHO细胞中进行.
- 一个无病毒的复合酶介导磁带交换 (RMCE) 系统生成了CRISPRa库.
- 细胞被培养在标准和超体介质中,然后进行下一代测序.
主要成果:
- 122个基因被显著丰富,171个基因在高度条件下被耗尽.
- 23个候选基因的CRISPR激活在压力下增强了细胞生长.
- 稳定的Siah2或C2cd4a表达改善了细胞生长,并增加了bsAb的产量高达1.3倍.
- 将CRISPRa与CRISPR淘汰Zfr相结合,进一步促进了细胞生长和bsAb产量.
结论:
- 克里斯普拉查有效地识别了赋予超体应激抵抗力的基因.
- 有针对性的基因激活可以提高CHO细胞的性能和治疗性蛋白质的产生.
- 整合CRISPRa和CRISPR淘汰方法为细胞系工程提供了协同效益.
