[使用数字PCR对流感A/B病毒和RSV验证标准的量化]

科学领域:

• 分子诊断学 分子诊断
• 病毒学 病毒学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 方法验证和验证对于使用定量标准的微生物诊断试验至关重要.
• 在核酸测试中使用整个病毒标准,可以全面评估所有诊断步骤.
• 对呼吸道病毒的商业定量标准有限,需要开发新的方法.

研究的目的:

• 为流感A病毒 (infA),流感B病毒 (infB) 和呼吸道同胞病毒 (RSV) 制定定量核酸标准.
• 使用数字聚合酶链反应 (dPCR) 精确量化病毒核酸.
• 评估dPCR方法对这些呼吸道病毒的性能特征.

主要方法:

• 汇集了对RSV,infA和infB阳性的鼻拭片样本,用于准备标准.
• 病毒核酸量化是使用dPCR和商业原料/探针组进行的.
• 确定dPCR方法的分析灵敏度 (LoD),量化极限 (LoQ),可重现性和线性,并与定量逆转录实时PCR (qRT-PCR) 进行比较.

主要成果:

• 使用dPCR的infA,infB和RSV的LoD值分别为93.75,15.59和26.23拷贝/毫升.
• 测试内部和测试间的可重复性显示出较低的变化系数 (CV),与qRT-PCR相比,dPCR显示出显著较低的CV值 (p=0.0312).
• 线性分析给出了所有三种病毒的高确定系数 (r2 ≥0.99) 在一系列稀释中,dPCR度与qRT-PCR Ct值相关.

结论:

• 数字PCR是一种高度可复制和可靠的方法,用于获得定量核酸标准.
• 开发的定量标准可用于开发病毒载量测定试验和方法验证.
• 这项研究提供了一个模型,用于使用dPCR生产定量病毒核酸标准.