结晶切割增强超高分辨率显微镜用于跨细胞和组织的单蛋白成像

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物物理学的生物物理.
• 显微镜的使用方法

背景情况:

• 在纳米级地形绘制中成像的DNA点积累 (DNA-PAINT) 为纳米级成像提供了高多重和分子计数能力.
• 可变成像性能和目标可访问性的挑战限制了DNA-PAINT的更广泛应用.
• 强大的单蛋白成像和分子计数需要优化样本准备和成像技术的方法.

研究的目的:

• 为了提高DNA-PAINT的性能,以实现强大的单蛋白成像和分子计数.
• 改善多种生物样本的目标可访问性和成像一致性.
• 开发一种多功能工具,用于探索细胞和组织中的生物分子组织和相互作用.

主要方法:

• 整体内部反射光显微镜与物理切割的整合,特别是东木山冷切割.
• 开发一个以图形和动态增强的DNA-PAINT (tkPAINT).
• 应用tkPAINT用于核内部的局部分子计数和多重成像.

主要成果:

• 在使用tkPAINT.int的各种样本中实现了3纳米的定位精度.
• 证明增强图像结合和改善细胞完整性.
• 在HeLa细胞和小鼠组织中成功量化了RNA聚合酶II在现场的丰富性.
• 展示了tkPAINT在复杂化,多模式定位和3D成像方面的能力.

结论:

• tkPAINT显著提高了DNA-PAINT在纳米尺度成像,蛋白质定量和复合方面的能力.
• 该方法为研究生物分子组织在各种生物环境中提供了高精度和改进的性能.
• tkPAINT是一个通用的工具,用于推进分子生物学,生物物理学和先进显微镜技术的研究.