开发基于细胞的测定方法,通过qPCR检测具有复制能力的腺相关病毒

科学领域:

• 基因治疗载体制造 基因治疗载体制造
• 分子生物学分子生物学
• 病毒学 病毒学

背景情况:

• 重组腺相关病毒 (AAV) 是基因疗法的关键载体.
• 通过三重传染制造的AAV可能会产生具有复制能力的AAV (rcAAV) 污染物.
• 由于潜在的不良影响,检测rcAAV对于产品安全和监管合规性至关重要.

研究的目的:

• 开发一种敏感的基于细胞的测定方法,用于检测AAV制剂中的rcAAV.
• 建立一种可靠的基因治疗载体制造质量控制方法.
• 提供改善过程开发和确保产品安全的手段.

主要方法:

• 使用HEK293细胞开发基于细胞的测定方法.
• 在辅助腺病毒5的存在下,用AAV8转导细胞,进行三轮.
• 使用rep2基因作为rcAAV检测标记的定量PCR (qPCR).

主要成果:

• 建立了一个优化的2毫升尺度测定.
• 该测试尽量减少了假阳性结果.
• 实现了每10^6个载体基因组1rcAAV的可报告结果灵敏度.

结论:

• 开发的测定方法对于检测rcAAV污染物具有敏感性和特异性.
• 这种方法提高了基因治疗产品的安全性和有效性.
• 该测试方法可适应其他AAV血清型,支持在工艺开发中的更广泛应用.