克洛斯特里的功能性表征 突变四点突变的epsilon毒素
Roopa Anandamurthy Hemanth1, Mandrira Ramakrishna Namrutha1, Suresh Bindu1
1ICAR-National Institute of Veterinary Epidemiology and Disease Informatics (NIVEDI), Post Box No. 6450, Yelahanka, Bengaluru, 560064, Karnataka, India.
概括
创建了一个非有毒的Clostridium perfringensepsilon毒素 (Etx) 突变,并显示其结构类似于野生类型. 这种突变蛋白质会产生抗原特异性抗体,显示出新的疫苗和诊断工具的潜力.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 来自Clostridium perfringens的埃普西隆毒素 (Etx) 在小反动物中引起肠道毒素 (ET).
- 目前的疫苗使用化学无活化Etx毒素.
- 非有毒的Etx突变为改善诊断和亚单位疫苗提供了潜力.
研究的目的:
- 开发和描述一个非有毒的,重组四点突变的epsilon毒素 (Etx).
- 评估突变者的结构完整性,功能活性和免疫性.
- 评估其在免疫试验和ET控制的替代疫苗策略中使用的潜力.
主要方法:
- 一个合成的,编码子优化的四重点突变 (Y30A,H106P,H149A,Y196A) 的 etx基因被构建.
- 再组合蛋白 (rEtx-突变蛋白) 在大肠杆菌中得到表达,并使用亲和色谱进行净化.
- 功能性特征包括体外和体外毒性测定,结构分析和小鼠,子和几内亚猪的免疫性研究.
主要成果:
- 该rEtx-突变蛋白 (331 aa,~36 kDa) 已成功生产和净化.
- 在结构上,突变蛋白与野生型Etx相似,并被素激活.
- 这种rEtx突变体在体外或体内没有表现出毒性,并且在多种动物模型中引起了抗原特异性抗体.
- 突变蛋白通过间接ELISA检测到ET接种疫苗的羊血清中的抗体.
结论:
- 非有毒的rEtx突变蛋白在结构上类似于野生型Etx.
- 它具有免疫性,可以引起特定的抗体,显示出对肠毒性病的诊断潜力.
- 这种突变蛋白代表了开发针对ET的新型亚单元疫苗的有希望的候选人.
