没有形态变化的Allostery:一个本地质谱视角.
He Mirabel Sun1, Kacie A Evans1, Morgan Powers2
1Department of Chemistry, Texas A&M University, College Station, Texas 77843, United States.
可变温度原生电喷射电离-质谱学 (vT-nESI-MS) 揭示了缓冲区选择如何影响GroEL单环突变体 (SR1) 中的核酸结合. 温度和缓冲条件显著改变了蛋白质动力学和结合热力学,表明没有重大结构变化的全ostery.
科学领域:
- 生物化学和生物物理学
- 质谱测量质量谱测量
- 蛋白质动力学 蛋白质动力学
背景情况:
- 原生电喷射电离质谱 (nESI-MS) 对于研究完整的蛋白质及其复合体至关重要.
- 可变温度 (vT) -nESI-MS增强了蛋白质 - 配体相互作用的热力学研究.
- GroEL单环突变体 (SR1) 作为研究蛋白核酸结合的模型系统.
研究的目的:
- 研究温度和本地ESI缓冲器对结合SR1.1的核酸 (ADP) 的影响.
- 在不同的条件下确定ADP结合亲缘关系,合作性和力-力补偿 (EEC).
- 阐明缓冲组合如何影响SR1的形状,稳定性和动态.
主要方法:
- 使用了可变温度原生电喷射电离-质谱法 (vT-nESI-MS).
- 采用离子运动谱法 (IMS) 来分析碰撞横截面 (CCS).
- 我们比较了三个常见的本地ESI缓冲器:酸 (AmAc),三乙烯酸 (TEAA) 和乙烯基二酸 (EDDA).
主要成果:
- 平均电荷状态 (Z_avg) 和CCS的温度依赖的变化表明SR1结构,稳定性和动态的缓冲器诱导的变化.
- 根据温度和缓冲器类型,ADP的结合合作性有很大差异:在低温下在AmAc中高度合作,在TEAA中不那么合作,在EDDA中不存在.
- 观察到的-补偿 (EEC) 和热容量的变化表明ADP结合影响SR1的形状状态,尽管IMS没有检测到大规模的结构变化.
结论:
- 缓冲组合和温度对SR1动力学和核酸结合热力学进行了关键调节.
- 这些发现支持SR1-ADP结合的"无 (可测量的) 形状变化"的全质性概念.
- 结果与对蛋白质折叠和连接体结合中的水化作用的研究一致,突出显示了溶剂相互作用的作用.
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