无提取RT-RPA测定用于检测HPV16,HPV18,和HPV45mRNA表达的检测
Emilie Newsham Novak1, Ariel Ma1, Kathryn A Kundrod1,2
1Department of Bioengineering, Rice University, Houston, TX, USA.
Scientific reports
|August 19, 2025
概括
一种新的,简化的方法可以在子宫细胞中检测高风险的人类乳头瘤病毒 (hrHPV) mRNA. 这种敏感和特定的测试适用于资源有限的环境,提高了宫癌查的可访问性.
科学领域:
- 分子诊断学 分子诊断学
- 病毒学 病毒学
- 公共卫生 公共卫生
背景情况:
- 高风险人类乳头瘤病毒 (hrHPV) mRNA是比DNA更具特异性的宫癌风险生物标志物.
- 目前的hrHPV mRNA检测方法复杂,昂贵,需要专门的设备,限制在资源有限的环境中使用它们.
研究的目的:
- 开发一种灵敏,特定和最小仪器仪表的方法,用于检测脱皮的宫细胞中的HPV16,HPV18和HPV45mRNA.
- 为资源有限的环境创建一个可访问的hrHPV mRNA测试解决方案.
主要方法:
- 开发了HPV16,HPV18,和HPV45 E7 mRNA检测的实时逆转录重组酶聚合酶放大 (RT-RPA) 外测试.
- 创建了一种使用酶溶解和DNA降解的无提取样本制备方法.
- 用培养细胞和宫阴道样本验证了RT-RPA测定.
主要成果:
- 在RT-RPA测定中,使用便携式度仪实时检测到每次反应≥100个HPV E7 mRNA副本.
- 没有提取的方法允许从原始细胞溶解物中进行特定的mRNA放大.
- 对11个宫性阴道样本的测试显示,与RT-qPCR100%一致,包括阳性HPV16mRNA检测.
- 尖样本成功检测到HPV16,HPV18和HPV45类型.
结论:
- 开发的RT-RPA方法对 hrHPV mRNA检测具有敏感性和特异性.
- 简化样本准备和便携式检测系统为当前复杂的方法提供了可行的替代方案.
- 这种原型测试有可能在资源有限的环境中显著改善对hrHPV mRNA测试的准入,帮助预防宫癌的努力.
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