通过快速敏感的液体染色学高分辨率质谱测定基于RNA的小疗法及其过程杂质的特征
Silvia Millán-Martín1, Felipe Guapo1, Sara Carillo1
1National Institute for Bioprocessing Research & Training, Characterisation and Comparability Laboratory, Fosters Avenue, Mount Merrion, Blackrock, Dublin, A94 X099, Ireland.
Journal of pharmaceutical and biomedical analysis
|August 21, 2025
概括
本研究使用离子对逆相LC-HRMS/MS进行敏感的分析方法来描述改性RNA疗法. 该方法精确验证序列,并识别单链抗意义寡核酸 (ss-ASOs) 中的杂质.
科学领域:
- 分析化学
- 制药科学
- 生物化学
背景情况:
- 寡核酸是一种重要的新兴疗法,需要强大的分析方法来控制质量.
- 监管机构要求对基于RNA的药物初级结构进行实证,包括终结和修改,以确保安全性和有效性.
- 化学修饰的单链抗意义寡核酸 (ss-ASOs) 具有分析挑战.
研究的目的:
- 开发和验证一种敏感的高分辨率质谱 (HRMS/MS) 方法来表征修改后的SS-ASOs.
- 评估基于氨基的离子对逆相LC方法,使用轻度ESI源进行杂质分析.
- 评估该方法在基于RNA的治疗中进行序列验证和杂质识别的能力.
主要方法:
- 基于氨基的离子对逆相液态染色学 (IP-RPLC) 与高分辨率质谱学 (HRMS/MS) 相结合.
- 使用轻微的电喷离电离源 (ESI) 和具有中等疏水性的离子配对试剂.
- 分析了第二代和第三代ss-ASO,其中包括各种骨干,糖 (2'-位置) 和基因修改.
主要成果:
- 开发的HRMS/MS方法实现了高灵敏度和质量准确性,用于SS-ASO的完整和测序级分析.
- 完整的分析允许检测和定量完整的产品和杂质,包括降解剂,即使没有完全的染色分离.
- 发现的最常见的杂质是基 (PO) 转换和故障序列缩短器.
结论:
- IP-RPLC-HRMS/MS 方法对于修改后的 ss-ASOs 的序列验证和杂质识别是有效的.
- 优化的方法减少了离子对添加物和源中的杂质,提高了特征的准确性.
- 这种分析方法支持基于RNA的治疗药物的质量控制.
