微流LC-MS/MS揭示了与增强的功效和稳定性相关的复合腺相关病毒的平台特定的转化后修饰特征:基因治疗的质量控制框架

科学领域:

• 基因治疗向量表征
• 生物制药制造业
• 蛋白质组学和翻译后的修改

背景情况:

• 重组腺相关病毒 (rAAV) 是基因治疗的关键载体,但对囊后翻译修饰 (PTM) 的理解是有限的.
• 虽然PTM对rAAV的功效,免疫性和制造的一致性具有重要影响,但它们在不同生产平台上的表征是不完整的.
• 需要对PTM进行全面的分析,以优化rAAV的产生并确保治疗效果.

研究的目的:

• 对临床相关的rAAV5和rAAV9血清型进行全面分析和比较.
• 评估PTM对哺乳动物 (HEK293) 和昆虫 (Sf9) 细胞生产平台的载体效力和传染性的影响.
• 建立PTM档案作为监测rAAV批次的一致性的潜在质量属性.

主要方法:

• 使用微流LC-MS/MS与电子激活解离 (EAD) 进行rAAV载体的PTM分析.
• 在符合纯度和热稳定性条件下的HEK293和Sf9细胞中产生载体.
• 在PTM表征的同时进行了体外功效和传染性测定.

主要成果:

• 与HEK293衍生的载体相比,Sf9衍生的rAAV载体的PTM负荷高出14%.
• 由HEK293衍生出的rAAV显示出1. 9倍的强度和显著降低的物理与传染性颗粒比率 (P:I).
• 在EAD碎片化中,发现与特定的除amidation位点相关的isoaspartate形成,并且在Sf9 rAAV9批次中观察到PTM位点数的低变异性.

结论:

• 在HEK293和Sf9生产平台之间,PTM景观是不同的,影响了rAAV载体的强度和传染性.
• 特定的PTM,如脱化诱导的异酸盐形成,可能会影响载体的稳定性和性能.
• 在rAAV基因疗法制造中,PTM分析为质量控制和批量一致性监测提供了一个有前途的途径.