相关实验视频
Updated: Sep 9, 2025
08:48
Quantitation of γH2AX Foci in Tissue Samples
Published on: June 28, 2010
14.5K
使用免疫光和斐济软件量化照射细胞中的γH2AX焦点
Lu Deng1, Danning Wang1, Lingying Wu1
1Department of Gynecologic Oncology, National Cancer Center/National Clinical Research Center for Cancer/Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, China.
Bio-protocol
|August 28, 2025
概括
本研究引入了一种使用斐济宏的自动化工作流程,用于通过γH2AX焦点精确量化DNA双链断裂 (DSB). 这种方法提高了细胞应激研究中的可重复性和高吞吐量分析.
科学领域:
- 细胞生物学
- 基因组学
- 分子生物学
背景情况:
- 量化DNA双链断裂 (DSB) 对于理解基因组损伤和细胞应激反应至关重要.
- 标志物 γH2AX 在DSB中被广泛使用,但目前的量化方法缺乏标准化和可重现性.
- 手动或半定量分析引入用户偏差并限制吞吐量.
研究的目的:
- 开发一种标准化和自动化的工作流程,用于量化照射细胞中的γH2AX焦点.
- 提高DNA双链断裂检测的可复制性和减少用户偏差.
- 创建一个高吞吐量方法适用于核焦点和类似殖民地结构.
主要方法:
- 开发一个自定义的斐济宏图,用于自动计算 γH2AX焦点.
- 实施标准化方案,包括细胞照射,免疫光染色和图像采集.
- 适应多井板格式的工作流程,包括克隆性测试.
主要成果:
- 自动化的斐济宏允许高通量定量核光焦点的单核分辨率.
- 标准化的工作流程确保了DNA双链断裂检测的可重复性和交叉样本一致性.
- 该方案具有多样性,适用于各种测试格式的核焦点和类似殖民地结构.
结论:
- 这种自动化工作流提供了一种可重复的标准化方法来量化DNA损伤.
- 这种协议可方便对γH2AX焦点进行高通量分析,最大限度地减少用户偏差.
- 该方法的可适应性使其适用于DNA损伤和克隆性测试的常规实验室使用.
