基于抗体尾酒的免疫 afinity-LC-MS 方法使循环中的前胰岛素蛋白质和C-的超敏感和稳健量化成为可能
Qingqing Shen1, Wang Cao1, Ming Zhang1,2
1The Department of Pharmaceutical Sciences, University at Buffalo, Buffalo, New York 14214, United States.
Analytical chemistry
|August 28, 2025
概括
一种新的LC-MS测定精确地测量循环中的益胰岛素蛋白质,这对于糖尿病研究至关重要. 这种方法可以将新发型1型糖尿病 (T1D) 患者与对照患者区分开来,从而提供有关β细胞功能的见解.
科学领域:
- 生物标志物的发现和验证
- 分析化学
- 内分泌学和新陈代谢
背景情况:
- 精确测量循环中的亲胰岛素蛋白质对于糖尿病研究至关重要.
- 之前的测定缺乏精确量化多种益胰岛素蛋白质形式所需的特异性和灵敏性.
- 这种限制阻碍了对β细胞功能和疾病进展的全面了解.
研究的目的:
- 开发一种高度敏感和特定的液态染色体质谱 (LC-MS) 试验法,用于量化完整的亲胰岛素及其主要蛋白形式 (des-31,32和des-64,65亲胰岛素) 和循环中的C-.
- 首次将这种新型测定方法应用于临床组中的亲胰岛素蛋白质,包括新发型1型糖尿病 (T1D).
- 评估这种试验在区分疾病状态和理解β细胞动态方面的有用性.
主要方法:
- 使用优化的抗体合剂来缓解蛋白质形式之间的偏差.
- 素-C (Lys-C) 消化生成每个亲胰岛素蛋白质的独特特征.
- 捕获纳米LC与场不对称离子移动光谱/微分循环电压测量质谱 (FAIMS/dCV-MS) 结合,用于超敏感和选择性分析,增强信号噪声比.
主要成果:
- 开发的试验显示出极高的灵敏度,血清下限定量 (LOQ) 低至1. 7 pg/ ml.
- 该试验成功地将对照患者与新发型T1D患者区分开来,而并行全益素ELISA无法区分.
- 在临床组中观察到不同的亲胰岛素蛋白质的相对丰度比率,表明不同的β细胞处理或分泌.
结论:
- 这种新型LC-MS试验是第一个能够灵敏地量化主要循环的亲胰岛素蛋白质,克服了以前的分析局限性.
- 该测试提供了有关β细胞功能和糖尿病病理生理学的宝贵见解,特别是T1D.
- 开发的策略广泛适用于其他关键生物标志物的向蛋白型测量.
