使用不稳定域对蛋白质组合进行时间解析分析,绘制SARS-CoV-2 nsp15的动态相互作用
Crissey Cameron1, R Mason Clark2, Adam M Metts1
1Department of Chemistry, Vanderbilt University, Nashville, Tennessee 37235, United States.
ACS chemical biology
|September 1, 2025
概括
我们开发了一种追踪蛋白质相互作用的方法. 这项技术确定了新的SARS-CoV-2蛋白伴侣,揭示了病毒感染动态的洞察力.
科学领域:
- 分子生物学
- 病毒学
- 蛋白质组学
背景情况:
- 动态的蛋白质相互作用是细胞过程的基础.
- 了解这些相互作用的时间顺序对于破译生物机制至关重要.
- 现有的方法缺乏时间分辨率来捕获短暂的蛋白相互作用.
研究的目的:
- 开发一种新的蛋白质与蛋白质相互作用的时间解析方法.
- 研究病毒感染期间蛋白质相互作用的时间动态.
- 确定SARS-CoV-2非结构蛋白15 (nsp15) 的新型蛋白相互作用伙伴.
主要方法:
- 开发TRAPPED (蛋白质-蛋白质组合的时间解析分析) 方法.
- 使用与感兴趣的蛋白质合的二酸降解酶破坏稳定域 (DHFR ((DD)).
- 使用三甲 (TMP) 进行时间稳定,并使用Click化学进行标记和质谱.
- 在2小时内评估SARS-CoV-2 nsp15的蛋白相互作用.
主要成果:
- 确定GEMIN5和YBX3为SARS-CoV-2 nsp15相互作用体,将它们与病毒RNA结合和感染调节联系起来.
- 发现了CACYBP和FHL1作为nsp15相互作用体,这表明它们在破坏宿主ERK1/2信号传递方面发挥了作用.
- 证明nsp15的相互作用在转化后0至2小时保持稳定.
结论:
- 通过TRAPPED方法,可以精确地绘制蛋白质与蛋白质之间的相互作用.
- 这种方法为SARS-CoV-2感染的分子机制提供了新的见解.
- TRAPPED适用于研究其他时间调节的生物过程,包括信号转导.
