使用qPCR和dPCR的基于腺病毒载体的疫苗的生物分发和脱落的方法验证和评估
Yoichi Tanaka1, Sayaka Hamano1, Akiko Ishii-Watabe2
1Division of Medicinal Safety Science, National Institute of Health Sciences, Kanagawa 210-9501, Japan.
Molecular therapy. Methods & clinical development
|September 2, 2025
概括
这项研究开发并验证了数字PCR (dPCR) 和定量PCR (qPCR) 方法来量化腺病毒载体疫苗. 这两种方法都被证明是准确和精确的,这表明它们适用于疫苗开发中的生物分布和脱落评估.
科学领域:
- 疫苗学
- 分子生物学
- 生物分析
背景情况:
- 基于病毒载体的疫苗需要进行生物分布和分泌评估.
- 数字PCR (dPCR) 和定量PCR (qPCR) 是向量拷贝数量的关键.
- 目前缺乏生物分析PCR测试的监管指南.
研究的目的:
- 开发和验证用于量化腺病毒载体疫苗的dPCR和qPCR方法.
- 评估模型疫苗在小鼠中的生物分布.
- 提出适用于未来监管准则的方法验证的预定义验收标准.
主要方法:
- 开发并验证了模型腺病毒载体疫苗 (Ad-hCovHKU1S-2A-GFP) 的dPCR和qPCR测定.
- 设计了针对Ad和HKU1S序列之间的基因间区域的原料和探针.
- 使用1μg小鼠基因组DNA (gDNA) /反应进行方法验证,确定预先定义的接受标准和量化下限 (12个副本/反应用于dPCR,48个副本/反应用于qPCR).
主要成果:
- 这两种dPCR和qPCR测定都符合预先定义的准确性和精度的接受标准 (内部和间接测试).
- 交叉验证显示dPCR和qPCR之间的定量结果是可比的.
- 该研究成功评估了小鼠中的腺病毒载体疫苗的生物分布.
结论:
- 开发的dPCR和qPCR方法可用于定量病毒载体疫苗.
- 拟议的验证参数和验收标准显示了对生物分布和脱落研究的监管准则的潜在适用性.
- 这项工作通过提供验证的分析方法来支持病毒载体疫苗开发的进步.
