通过单分子直接计数和数字PCR进行线性化等离子体DNA认证参考材料的开发和实验室间验证
Xia Wang1, Young-Kyung Bae2, Sae Rom Hong2
1Center for Advanced Measurement Science, National Institute of Metrology, 18 Beisanhuan East Road, Beijing, 100013, PR China.
Talanta
|September 2, 2025
概括
经过认证的参考材料对于精确的数字PCR (dPCR) 量化至关重要. 这项研究开发了可追溯的参考材料,提高了dPCR测量的可比性,并强调了跨平台验证量化的需要.
科学领域:
- 生物技术
- 测量学
- 分子生物学
背景情况:
- 数字PCR (dPCR) 对于基因突变和拷贝数变异的量化至关重要.
- 鉴于有限的认证参考材料 (CRM),确定dPCR校准的SI可追溯值具有挑战性.
- 缺乏CRM阻碍了dPCR结果的可比性.
研究的目的:
- 开发和描述dPCR的线性化等离子体DNA参考材料 (RM).
- 为了确定dPCR校准的SI可追溯拷贝数度值.
- 使用开发的RM来评估dPCR结果的可比性.
主要方法:
- 开发一个线性化等离子体DNA参考材料 (RM).
- 通过涉及三个国家测量机构 (NMI) 的实验室间比较进行了表征.
- 使用dPCR独立的单分子计数和dPCR进行正交量化.
- 同质性和稳定性的评估.
- 重力测量稀释以创建一个二次CRM.
- 使用二级CRM对四个dPCR平台的评估.
主要成果:
- 开发的RM证明了同质性和稳定性.
- 实验室间的比较显示了NMI之间强烈的一致性 (En < 1).
- 在扩大不确定性范围内确定结果的等价性.
- 二次CRM评估显示dPCR平台之间的差异高达10.5%.
- 在核酸量化中发现了显著高估的可能性.
结论:
- 开发的参考材料提供了dPCR校准的SI可追溯值.
- CRM对于验证dPCR量化和确保平台间可比性至关重要.
- 需要标准化CRM来解决dPCR系统中核酸量化的差异.
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