针对SARS-CoV-2变种开发基于脂质体的血清检测,特别强调维持蛋白质抗原性所需的合化学物质

科学领域:

• 生物结合化学
• 免疫诊断
• 脂质体技术

背景情况:

• 蛋白质与脂质体的结合对于生物分析和药物输送至关重要.
• 量化SARS-CoV-2中和抗体需要强大的测试方法.
• 对于抗体检测而言,各种关注变体 (VoC) 中的尖端蛋白序列的变化构成挑战.

研究的目的:

• 为量化SARS-CoV-2中和抗体开发和验证基于脂质体的替代试验.
• 调查不同合化学物质对SARS-CoV-2变种中的蛋白质功能和抗原性的影响.
• 建立一个多功能平台,用于脂质体的定位蛋白固定.

主要方法:

• 使用N端Cys-tag和C端Avi-tag策略将SARS-CoV-2尖端蛋白变体 (RBD) 定位固定在脂质体上.
• 对EDC/NHS化学与特定部位的生物化和中性脂酶结合的比较.
• 对使用患者血清的伪病毒中和试验进行脂质组测试的验证.

主要成果:

• 标准EDC/NHS合化学导致不同Spike蛋白变体的显著功能损失.
• 在所有变体中恢复了蛋白质功能和增强了存储稳定性.
• 开发的脂质体试验与伪病毒中和试验具有很高的相关性,并确定了Alpha/Delta和Omicron变异的差异中和模式.

结论:

• 中性脂体提供了一个多功能平台,用于位点定向的蛋白质固定,独立于蛋白质序列变化.
• 这种方法提高了蛋白质的稳定性和功能性,这对于诊断测试的开发至关重要.
• 可适应性脂质组测试技术可应用于各种蛋白质和的诊断应用.