在使用特定位点的乙化重组组合H3蛋白质形式的上下电子喷射电离-质谱中对蛋白质离子相对比率的量化评估

科学领域:

• 蛋白质组学
• 质谱学
• 生物化学

背景情况:

• 电子喷射电离 (ESI) - 质谱 (MS) 对于分析翻译后修饰的蛋白质至关重要.
• 通过先进的多发性硬化技术,对完整的蛋白形状进行自上而下的分析越来越容易.
• 准确的蛋白形量化需要考虑转化后修改 (PTM) 对检测效率的影响.

研究的目的:

• 在上下ESI-MS中验证蛋白离子相对比率 (PIRR) 的可靠性,以量化具有不同PTM度的蛋白形态.
• 在不同的乙化水平和位上评估PIRR量化的准确性.

主要方法:

• 使用直角翻译系统,产生特定位点的乙化重组组合H3蛋白形体,控制乙化度.
• 使用紫外线光谱测量进行绝对量化.
• 通过直接输注-ESI-MS和弱阴离子交换/水友相互作用-ESI-MS分析的蛋白质组合.

主要成果:

• 蛋白离子相对比率 (PIRR) 始终与所有测试的基素H3蛋白形式的理论比率相匹配.
• 观察到的准确性与乙化程度或特定部位无关.
• 这证实了PIRR量化对具有异质PTM的蛋白质形式的稳定性.

结论:

• PIRR量化是一种有效和可靠的ESI-MS对蛋白质形式的自上而下的分析方法,特别是那些具有不同PTM的蛋白质形式.
• 这些发现支持使用PIRR来准确量化组织蛋白质形式.
• 这项研究强化了自上而下的质谱的有用性,用于详细的蛋白质形状表征.