基于SYBR绿色实时定量PCR的性能评估,用于从动物口腔样中检测SARS-CoV-2
María Emilia Bravi1, Nadia Analía Fuentealba1, Natalia Brasso1
1Laboratorio de Virología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, Argentina. 60 y 118, La Plata, Buenos Aires CP 1900, Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), CABA, Godoy Cruz 2290, Argentina.
Journal of virological methods
|September 7, 2025
概括
一个SYBR绿色实时定量PCR (qPCR) 试验有效地检测狗和猫的SARS-CoV-2. 这种具有成本效益的方法为动物监测和"一健康"倡议提供了高灵敏度和可重复性.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 一个健康监测
背景情况:
- 全球SARS-CoV-2流行病需要人类和动物种群的强大的诊断工具.
- 动物监测对于了解病毒传播动态和实施有效的"健康"战略至关重要.
- 现有的诊断方法可能并不总是适合在动物卫生中资源有限的环境.
研究的目的:
- 评估基于SYBR Green的实时定量PCR (qPCR) 试验,用于检测家用狗和猫样本中的SARS-CoV-2.
- 为了确定测试的灵敏度,特异性,线性和可重现性.
- 在动物群体中建立一个具有成本效益的SARS-CoV-2诊断工具.
主要方法:
- 使用梯度PCR和化曲线分析优化SYBR Green实时qPCR测定条件.
- 通过克隆和定量SARS-CoV-2 N基因目标来确定检测极限 (LOD).
- 分析了来自狗和猫的140个口腔口样本,结果通过基于商业探针的qPCR试验得到证实.
主要成果:
- 优化的SYBR绿色qPCR试验显示检测极限为2.1 × 10^2副本/μL.
- 该测试显示高特异性,没有与犬或猫类冠状病毒的交叉反应.
- 观察到高度的线性 (R2 = 0.997) 和优异的可重现性 (试验内CV<1.1%,试验间CV<2%).
- 在140个样本中,13个样本检测出SARS-CoV-2阳性,由商业测试证实.
结论:
- 绿色实时qPCR是一种敏感,特定和可重复的方法,用于检测动物样本中的SARS-CoV-2.
- 这种测试为基于探针的qPCR提供了一种具有成本效益的替代方案,在资源有限的环境中尤其有价值.
- 经过验证的试验可以支持One Health框架内的动物群体中SARS-CoV-2的流行病监测和控制.
