细菌谷氨酸合成酶作为一种新型代谢选择标记物,通过选择强度调节改善CHO细胞培养性能

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 代谢选择标记对于生物制药制造中的稳定细胞系生成和生产率至关重要.
• 目前的方法通常依赖于抗生素耐药性基因,这引发了环境和监管方面的担忧.
• 需要新的,高效的,无抗生素的选系统.

研究的目的:

• 研究细菌衍生型谷氨酸合成酶 (GS) 作为新型代谢选择标记物的潜力.
• 为了提高中国汉姆斯特卵巢 (CHO) 细胞培养性能和抗体生产.
• 用细菌GS标记物评估细胞系的生物过程性能和稳定性.

主要方法:

• 鉴定了GS-I蛋白,并从肠杆菌和actinomycetes基因组中提取出来.
• 通过稳定转染,对细菌GS酶在GS缺乏的CHO细胞中的功能评估.
• 对抗体标位,生物处理性能和细胞系稳定性的分析.
• 转录组分析以了解细胞调节机制.

主要成果:

• 与内源性GS相比,三种细菌GS酶显著增加了CHO细胞中的抗体标位 (3至4倍).
• 酶功能与溶剂可访问性和催化剂口袋几何学相关.
• 细菌GS标记物显示出优越的稳定池和克隆性能.
• 调节选择严格性增强表达,而不会影响细胞系稳定性.

结论:

• 细菌衍生的GS酶是哺乳动物细胞系的有效代谢选择标记物.
• 这些标记物提高了CHO细胞培养中的生产力和生物处理性能.
• 重新利用细菌酶为细胞系发展提供了一个有前途的无抗生素策略.